江蘇鹽城濱海康達醫(yī)院PCR實驗室

　　項目地點：江蘇

　　臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗室， 是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、冠狀病毒等感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進行檢測，可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒，（測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。）并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點，具有檢測結果可靠性、準確性和安全性和權威性。

       一般的PCR實驗室實驗區(qū)包括：試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。各區(qū)配套緩沖間及公共走廊。根據(jù)使用儀器的功能，實驗區(qū)可適當合并，例如使用實時熒光PCR儀的，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并?！缎滦凸跔畈《痉窝讓嶒炇覚z測技術指南（第四版）》指出，新冠病毒核酸檢測方法主要是實時熒光RT-PCR方法，所以用于新冠病毒檢測的PCR實驗室可以設置為“四區(qū)”或者“三區(qū)”。各區(qū)應設置機械通風系統(tǒng)，并設置緩沖間。各實驗區(qū)與緩沖間應有一定的壓差，保證合理的空氣流向，防止交叉污染。

三區(qū)平面圖

　　本項目建筑面積較小，故采用三區(qū)設計，合并擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)。

　　PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，宜采用全送全排的氣流組織形式。

　　氣流組織技術說明：

　　1.PCR實驗室暖通設計為全新風全排系統(tǒng)同時也是為了保證PCR實驗室壓差要求，初中效衛(wèi)生型新風機組給各區(qū)送新風，排風機組分別進行各區(qū)的排風，排風后再經(jīng)過***過濾和組合式外排廢氣處理裝置處理達標后高空排放到大氣中，為了避免交叉污染，沒有回風，嚴格控制送排風口風量大小保證各實驗區(qū)的壓力要求。

　　2.各區(qū)送排風機聯(lián)動啟停，先啟動排風機后啟動送風機，停機先停送風機后停排風機，這樣可以完全阻斷實驗室的污染泄露。

　　3.各實驗區(qū)域之間具備單向的氣流組織形式，形成單向流程的保護屏障，實驗室換氣次數(shù)宜少于每小時10次。

　　4.實驗室氣流組織采用頂送底排，初中效送風，***底排風。

　　試劑準備區(qū)，該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。因此，該區(qū)并不產(chǎn)生污染源，但須確保試劑免受外界污染，如該實驗區(qū)按《標準》要求相對緩沖間設置為負壓，則緩沖間相對走廊需設置為正壓。其實，這個區(qū)域比較靈活，實驗區(qū)相對緩沖也可以設置為常壓或正壓，但緩沖間相對走廊需設置為正壓！

試劑準備區(qū)

　　標本制備區(qū)，該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。此區(qū)取樣時病毒還未滅活，且在取樣操作時，容易造成氣溶膠擴散。為保護人員安全，必須在生物安全柜內(nèi)操作，防止標本氣溶膠的擴散。此后，標本經(jīng)過滅活處理，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使操作人員在對樣本進行檢測時相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。因此，該區(qū)為主要污染區(qū)域，必須在生物安全柜內(nèi)操作！要求實驗區(qū)相對緩沖間設置為負壓，緩沖間相對走廊需設置為負壓。

標本制備區(qū)

　　在擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，兩區(qū)域主要分別進行的操作為DNA或cDNA擴增和擴增片段的測定。操作過程中，要防止含病毒核酸的氣溶膠通過開門卷吸等途徑，擴散出去對試劑與標本造成污染，造成“假陽性”現(xiàn)象。所以核酸擴增室及產(chǎn)物分析區(qū)相對緩沖間應呈相對負壓狀態(tài)，緩沖間相對走廊亦需設置為負壓。

走廊

　　為降低PCR實驗室對實驗室外部環(huán)境和人員帶來的風險，內(nèi)走廊相對實驗室外可以保持常壓或正壓，各區(qū)壓差可設置為5～10Pa。

走廊（壓差表）

　　注意事項：

　　1.PCR實驗室每個區(qū)應設置壓差表監(jiān)控實驗室壓差實時情況。

　　2.為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域壓差必須嚴格遵循單一方向流動，即只能從試劑準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)流動。